在生物實(shí)驗(yàn)中,常??吹阶贤饪梢姺止夤舛扔?jì)、可見分光光度計(jì)、熒光分光光度計(jì)。很多人下意識(shí)認(rèn)為它們可能是一種東西,其實(shí)不然,它們之間的區(qū)別還是蠻大的,一起來(lái)了解下吧。
首先我們來(lái)了解下紫外可見分光光度計(jì)與可見分光光度計(jì)與的區(qū)別
1、儀器分析的波長(zhǎng)范圍不一樣,紫外可見分光光度計(jì)的波長(zhǎng)范圍是:200nm-1000nm,其中200nm-330nm標(biāo)定為紫外光譜,330nm-800nm標(biāo)定為可見光譜,800nm-1000nm標(biāo)定為近紅外光譜。
而可見分光光度計(jì)的波長(zhǎng)范圍只在可見光譜區(qū)內(nèi)330nm-800nm。
2、儀器分析物質(zhì)也不一樣,紫外光譜大都分析有機(jī)物,可見光譜大都分析無(wú)機(jī)物,當(dāng)然也不是絕對(duì)的,只是大部分有機(jī)物的吸收敏感點(diǎn)在紫外光譜區(qū),無(wú)機(jī)物的吸收敏感點(diǎn)在可見光譜區(qū)。
3、在使用的光源有所不一,在目前國(guó)內(nèi)外的分光光度計(jì)中,大部分紫外光源用的是氘燈,可見光源用的是鎢燈,紫外燈源的價(jià)格相對(duì)可見燈源的價(jià)格要高很多,當(dāng)然也有一些用氙燈替代氘燈和鎢燈,其價(jià)格更高。
4、儀器結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)不一樣,紫外可見分光光度計(jì)要求儀器的體積相對(duì)可見分光光度計(jì)要大一些,這其中除了考慮多了一個(gè)燈的擺放位置,還要考慮到燈的散熱。
5、還有儀器其它的一些不一樣的,例如:電路設(shè)計(jì)原理、色散元件、光電轉(zhuǎn)換元器件等。
6、可見分光光度計(jì)一般使用玻璃比色皿即可,而紫外可見分光光度計(jì)的紫外區(qū)段需使用石英比色皿(最好是黑色石英比色皿,可以遮擋雜光)。
7、2者亦可以使用全波段酶標(biāo)儀代替。
然后我們?cè)賮?lái)說(shuō)說(shuō)紫外可見分光光度計(jì)與熒光分光光度計(jì)的區(qū)別
1、原理不一樣。熒光分光光度計(jì)由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍(lán)紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中,激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光,熒光經(jīng)過濾過和反射后,被光電倍增管所接受,然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來(lái)。紫外分光光度計(jì)是根據(jù)朗伯-比耳定律(Lambert-Beer)光吸收的基本定律,即物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長(zhǎng)的光能量。通俗的說(shuō),熒光分光光度計(jì)是測(cè)樣品中物質(zhì)被激發(fā)出了光能量,紫外分光光度計(jì)是測(cè)樣品中物質(zhì)吸收了光能量,原理完全不同。
2、光源不一樣。紫外可見分光光度計(jì)在紫外區(qū)使用氫燈或氘燈,在可見光區(qū)使用氘燈或溴鎢燈.它們發(fā)出的都是連續(xù)光譜,通過三棱鏡(中檔)、光柵(高檔)、濾光片(低級(jí))等分光,這樣兩種燈組合基本涵蓋了紫外-可見光的波長(zhǎng)范圍. 熒光分光光度計(jì)由氙弧燈發(fā)出的光通過切光器使其變成斷續(xù)之光以及激發(fā)光單色器變成單色光后,此光即為熒光物質(zhì)的激發(fā)光,被測(cè)的熒光物質(zhì)在激發(fā)光照射下所發(fā)出的熒光,經(jīng)過單色器變成單色熒光后照射于測(cè)樣品用的光電倍增管上.
3、儀器結(jié)構(gòu)不一樣。熒光分光光度計(jì)的光源和檢測(cè)器是成直角分布的,而紫外是成一條直線的.
4、儀器分析的物質(zhì)不一樣。紫外-可見分光光度計(jì)可用于大部分有色物質(zhì)的定量監(jiān)測(cè),通常需要使用各種各樣的顯色劑;熒光分光光度計(jì)可用于測(cè)試發(fā)光材料的發(fā)射光譜、激發(fā)光譜、時(shí)間掃描,不需要顯色劑,靈敏度比紫外-可見分光光度計(jì)高2-3個(gè)數(shù)量級(jí).
5、熒光分光光度計(jì)的比色皿是四壁均為光學(xué)面,而紫外僅兩面為光學(xué)面.